過氧化氫

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測定意義(yi) ：

H₂O₂是生物體(ti) 內(nei) 常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chan) 生，由CAT和POD等催化降解。H₂O₂不僅(jin) 是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。一方麵，H₂O₂可以直接或間接地氧化細胞內(nei) 核酸，蛋白質等生物大分子，並使細胞膜遭受損害，從(cong) 而加速細胞的衰老和解體(ti) ；另一方麵H₂O₂也是許多氧化應急反應中的關(guan) 鍵調節因子，。

測定原理：

H₂O₂與(yu) 硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦複合物，在415nm有特征吸收。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

試劑的組成和配製：

試劑一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入3mL濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體(ti) ×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體(ti) ×1瓶，4℃保存；

H₂O₂提取：

1、細菌或細胞樣品的製備：收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照每500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 組織樣品的製備：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

注意事項：

1、由於(yu) 試劑一易揮發，試劑一必須先預冷再加，研磨時必須在冰上研磨。

2、本試劑盒中試劑的揮發性較高，請帶一次性手套和口罩。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至415nm，蒸餾水調零。
2. 將試劑二、三和四37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3. 在EP管中按順序加入下列試劑

4000g，常溫離心10min，棄上清，留沉澱

加入試劑四溶解沉澱後，室溫靜置5min，取200μL轉移至微量石英比色皿或96孔板中測定415nm處吸光值。對照管隻要做一次即可。計算ΔA＝A測定-A對照。

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