信帆生物銷售丙酮酸脫羧酶（PDC）

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測定意義(yi) ：

PDC主要存在於(yu) 酵母中，是乙醇發酵的關(guan) 鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理：

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD⁺；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD⁺沒有；通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算PDC活性。

自備儀(yi) 器和用品：

研缽、冰、台式離心機、紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) ×1瓶，﹣20℃保存。

混合試劑：臨(lin) 用前配製，小心把試劑四轉移到試劑三中，充分溶解。

試劑六：液體(ti) ×1管，4℃保存。

粗酶液提取：

稱取約0.1g樣品，加試劑一1 mL，冰上充分研磨，16000g 4℃離心20min，取上清液，待測。

PDC測定操作：

1. 分光光度計預熱30min以上，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置於(yu) 25℃水浴中預熱30min以上。

3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻後於(yu) 340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為(wei) A1和A2。

4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻後於(yu) 340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為(wei) A3和A4。

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