WB實驗中關於抗體選購的幾個注意事項

WB實驗中關(guan) 於(yu) 抗體(ti) 選購的幾個(ge) 注意事項，上海信帆生物提供Western Blot檢測服務，下麵我們(men) 就Western Blot幾個(ge) 常規問題進行解答！

Q：如何選擇各個(ge) 公司的抗體(ti) ？
A：抗體(ti) 可盡量選擇進口原裝抗體(ti) ，如Abcam，CST，Santa cruz等公司的抗體(ti) 。根據靶蛋白的種屬（如人，小鼠，大鼠等）以及實驗用途（WB，免疫組化，細胞免疫熒光等）在各個(ge) 公司的網頁上選擇合適的抗體(ti) 。選擇抗體(ti) 時務必注意核對基因NCBI的序列號，以防止因為(wei) 基因的別名等原因導致買(mai) 錯抗體(ti) 。另外再購買(mai) 抗體(ti) 時需注意是否提供完善的售後服務，在廠商規定的時間內(nei) 未能得到預期的實驗結果可將詳細的實驗信息交給抗體(ti) 公司進行質量投訴，一般提供充分的實驗數據並且在保質期內(nei) 可以得到抗體(ti) 調換等售後服務。

Q：抗體(ti) 使用有哪些注意事項？
A：使用抗體(ti) 前需仔細閱讀說明書(shu) ，了解抗體(ti) 的保存條件以及不同用途下的推薦稀釋比例。較高濃度的抗體(ti) （>0.5mg/mL）通常性質更穩定，受生物試劑工藝和成本控製等因素影響，不同品牌的抗體(ti) 的濃度也不相同，所以購買(mai) 時應注意比較，經驗不足的實驗者往往被抗體(ti) 的體(ti) 積迷惑，要注意相同質量下低濃度的抗體(ti) 體(ti) 積反而更大。

Q：為(wei) 什麽(me) 各個(ge) 抗體(ti) 都要進行 WB預實驗？
A：對WB結果有決(jue) 定性影響的因素是抗體(ti) 的效價(jia) 和如果正確使用手中的抗體(ti) 。正確使用抗體(ti) 可以保證抗體(ti) 效價(jia) 不被過分的拮抗，與(yu) 抗原更加有效的結合，從(cong) 而獲得特異性和非特異性背景之間差異的大化。每一個(ge) 抗體(ti) 都有其特性，因此我們(men) 必須通過WB預實驗獲得背景小，非特異性條帶少的實驗結果。

預實驗的內(nei) 容如下：

1）確定一抗的稀釋比例和孵育時間；

2）選擇合適的封閉液及封閉時間；

3）調節合適的上樣量，使內(nei) 參條帶灰度值趨於(yu) 一致。

Q：半幹轉和濕轉的優(you) 缺點有哪些？如何選擇？
A：半幹轉和濕轉兩(liang) 種轉膜方式各有優(you) 劣。濕轉適合所有的蛋白尤其分子量大的蛋白，轉膜效率佳，但對試劑消耗量較大，轉膜時間長於(yu) 半幹轉；半幹轉適合分子量小於(yu) 100KD的蛋白，省時、省試劑。

Q：什麽(me) 是WB的灰度半定量分析？
A：通常用Image J 或photoshop軟件對各個(ge) 樣本的目的蛋白及其內(nei) 參蛋白曝光後膠片的灰度值進行計算，按照灰度值的高低來半定量分析各個(ge) 樣品中蛋白的表達差異。

Q：WB進行幾次重複實驗？
A：我們(men) 常規報價(jia) 的服務內(nei) 容為(wei) 進行預實驗（摸索實驗條件）並提供一次正式實驗WB膠片結果。預實驗一般會(hui) 對封閉條件，抗體(ti) 濃度，孵育時間等條件進行多次重複以獲得一次優(you) 的正式實驗結果。客戶若要求進行2-3次的生物學重複實驗，請在簽訂合同前特別說明，我們(men) 會(hui) 根據工作量的增加收取相應的費用。

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