信帆生物為您提供：I型鼠尾膠原蛋白的使用方法

信帆生物為(wei) 您提供：I型鼠尾膠原蛋白的使用方法

購買(mai) I型鼠尾膠原蛋白找上海信帆生物，專(zhuan) 業(ye) 供應I型鼠尾膠原蛋白。

鼠尾膠原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen 的方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉澱、磷酸氫二鈉沉澱等步驟製備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用於(yu) 包被細胞培養(yang) 器皿，培養(yang) 一些在普通細胞培養(yang) 器皿中不易貼壁的細胞。也可用於(yu) 製備三維膠，模擬真實的生長環境，使細胞在三維環境中生長。

1，在使用鼠膠原蛋白 I 型包被的細胞培養(yang) 皿中檢查到 PC-12 細胞的貼壁和生長。

2，在 1mg/ml 濃度以上，pH 為(wei) 7 左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到 NIH-3T3 細胞在三維膠內(nei) 正

常生長、PC-12 細胞在三維膠表麵正常生長。

使用方法：

1、細胞培養(yang) 器皿的表麵包被 推薦濃度： 1-5ug/cm2

以包被濃度為(wei) 2 ug/cm2為(wei) 例：用無菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到 0.012mg/ml。

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表麵，開蓋在超淨台上過夜晾幹。 也可以在室溫放置 1小時後，用PBS洗3-4次後直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(ge) 月以上的時間。

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2、三維膠原的製備

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/mL以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠，建議成膠濃度1-2mg/mL。膠原蛋白溶解於(yu) 0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06×體(ti) 積的 0.1mol/L NaOH 來中和。

需要的溶液（均需要無菌、預冷）：10×PBS（可含10 mg/L的酚紅用於(yu) pH指示）或10×培養(yang) 液，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，雙蒸水

A． 不含細胞的三維膠原的製備（以配製1mL，1mg/mL三維膠為(wei) 例）：將200μL鼠尾膠原蛋白I型(5mg/mL)加到置於(yu) 冰浴的離心管中，加入 690μL H2O。然後加到12μL 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12μL 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(hui) 由於(yu) NaOH不能迅速混勻而產(chan) 生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入100μL 10×PBS或10×培養(yang) 液，混勻後立即加到培養(yang) 器皿中(混勻後pH為(wei) 7左右，如果PBS或培養(yang) 液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yang) 器皿在室溫(25度左右)下放置20分鍾待膠凝固後，轉移到培養(yang) 箱內(nei) 。如果配製中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體(ti) 積的細胞培養(yang) 液預平衡。

B．含細胞的三維膠原的製備（以配製1 mL，1mg/mL三維膠為(wei) 例）：準備好懸浮於(yu) 培養(yang) 液的細胞，並放置於(yu) 冰浴中。將200μL鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12μL 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(hui) 由於(yu) NaOH不能迅速混勻而產(chan) 生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL 10×PBS或10×培養(yang) 液，混勻(混勻後pH為(wei) 7左右，如果PBS或培養(yang) 液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760μL的細胞懸浮液，混勻後立即加到培養(yang) 器皿中。將培養(yang) 器皿在室溫下放置20分鍾待膠凝固後，加入適當體(ti) 積的細胞培養(yang) 液，轉移到培養(yang) 箱中培養(yang) 。

注意事項：

鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

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