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檢測高密度脂蛋白對於血清和組織樣本的處理方法匯總

更新時間:2018-05-15      瀏覽次數:3144

檢測高密度脂蛋白對於(yu) 血清和組織樣本的處理方法匯總​!

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 樣本處理:

血清(漿):直接測定,如超過線性範圍用生理鹽水稀釋後測定。 ②、培養(yang) 液樣本:吸取培養(yang) 液,1000 轉/分,離心 10 分鍾,取上清測定。

 [注]:一般建議細胞密度在 100萬(wan) 個(ge) /ml以上。 ③、組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體(ti) 積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體(ti) 積的勻漿介 質,冰水浴條件下機械勻漿,2500 轉/分,離心 10 分鍾,取上清液待測。

 [注]:1、如組織樣本為(wei) 非高脂樣本,勻漿介質統一用磷酸鹽緩衝(chong) 液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。

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 2、如組織樣本為(wei) 高脂樣本或部分為(wei) 高脂樣本,勻漿介質可統一用無水乙醇進行提取。 

細胞樣本: A、細胞收集:將製備好的細胞懸液取出,1000 轉/分,離心 10 分鍾,棄上清液,留細胞沉 澱;用等滲緩衝(chong) 液(推薦0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩衝(chong) 液)清洗1~2 次,同樣1000 轉/分,離心10 分鍾,棄上清液,留細胞沉澱;

 B、細胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩衝(chong) 液或生理 鹽水)進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5 秒/次,間隔 30 秒,重複 3~5  次)或手動勻漿,製備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分鍾),裂解好的液體(ti) 不離心直接測定。 

[注]:一般建議細胞密度在 100萬(wan) 個(ge) /ml以上。破碎好的液體(ti) 可顯微鏡觀察細胞是否破碎* 

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