雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒的操作步驟！

雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒的操作步驟！

注意：

正式測定之前選擇 2-3 個(ge) 預期差異大的樣本做預測定，確保蛋白濃度在 1～ 10mg/ml 範圍內(nei) 。

測定意義(yi) ：

樣品可溶性蛋白質含量常常用於(yu) 酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用於(yu) 食品等質量分 析。

測定原理：

強堿性溶液中，雙縮脲與(yu) CuSO4 形成紫色絡合物；紫色絡合物顏色的深淺與(yu) 蛋白質濃度成 正比，而與(yu) 蛋白質分子量及氨基酸成分無關(guan) ，故可用來測定蛋白質含量。

該方法測定範圍為(wei) 1~10mg 蛋白質，適用於(yu) 蛋白質濃度高的樣品，尤其是動物材料。

自備儀(yi) 器和用品：

離心機、可見分光光度計、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配製

試劑一：液體(ti) ×1 瓶，4℃保存。

標準品：液體(ti) ×1 瓶，5 mg/mL，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質提取

1. 液體(ti) 樣品：澄清無色液體(ti) 樣品可以直接測定。

2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（自備，根據需要選用酶提取緩衝(chong) 液或者蒸餾水或者生理鹽水）） 冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建 議 500 萬(wan) 細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然後 8000g，4℃，離心 10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒的操作步驟！

測定操作

1. 分光光度計預熱 30 min，調節波長到 540 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 蒸餾水，1000μL 試劑一，混勻後室溫靜置 15 min，於(yu) 540nm 比色，記為(wei) A 空白管。

3. 標準管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 標準液，1000μL 試劑一，混勻後室溫靜置 15 min，於(yu) 540 nm 比色，記為(wei) A 標準管。

4. 測定管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 待測液，1000μL 試劑一，混勻後室溫靜置 15 min，於(yu) 540nm 比色，記為(wei) A 測定管。

注意：

空白管和標準管隻需測定一次。 樣品中蛋白質濃度計算公式 C 待測（mg/mL）= C 標準管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) =5×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

注意事項：

1.樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 範圍內(nei) ，低於(yu) 1mg/ml 不能用此法，高於(yu) 10mg/ml 須做相應 稀釋。因此測定前用 1~2 個(ge) 樣做預實驗，確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 範圍內(nei) 。

2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩 衝(chong) 液幹擾，提取液中應不含這些物質；否則改用 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒的操作步驟！