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促血管生成素1(ANG1)試劑盒*

更新時間:2017-09-08      瀏覽次數:1585

促血管生成素1(ANG1)試劑盒基本信息

Ang1是一族分泌型的生長 因子,該家族主要由Ang—l、Ang一2、Ang一3和Ang一4 4種因子組成。Ang—l基因定位於(yu) 8p22,分子量約70 kD,由498個(ge) 氨基酸組成,含3個(ge) 結構域,從(cong) N一端100個(ge) 氨基酸為(wei) *結構域,無同源性;第100—280氨基酸為(wei) 第二結構域呈螺旋狀盤繞,具有分泌型信號肽的典型特征;第280—496氨基酸是第三結構域,其空間排列方式與(yu) 膠原蛋白家族極為(wei) 相似,稱為(wei) 膠原蛋白樣片段L3。

促血管生成素1(ANG1)試劑盒實驗條件選擇

在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

  (1) 固相載體(ti) 的選擇:許多物質可作為(wei) 固相載體(ti) ,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體(ti) ,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

  (2) 包被抗體(ti) (或抗原)的選擇:將抗體(ti) (或抗原)吸附在固相載體(ti) 表麵時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被後,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對於(yu) 多數蛋白質來說通常為(wei) 1~10μg/ml。

  (3) 酶標記抗體(ti) 工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價(jia) 的滴定(見酶標記抗體(ti) 部份)。然後再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體(ti) 分別為(wei) 不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體(ti) 的選擇:對供氫體(ti) 的選擇要求是價(jia) 廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(ti) (如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體(ti) ,如TMB和ABTS是目前較為(wei) 滿意的供氫體(ti) 。底物作用一段時間後,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鍾為(wei) 宜。底物使用液必須新鮮配製,尤其是H2O2在臨(lin) 用前加入。

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