PRODUCT CLASSIFICATION
產品分類丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒簡介
丙氨酸氨基轉移酶是一種參與(yu) 人體(ti) 蛋白質新陳代謝的酶),起加快體(ti) 內(nei) 蛋白質氨基酸在體(ti) 內(nei) 轉化的作用,它廣泛存在於(yu) 人體(ti) 各種組織、器官、肌肉、骨骼中,以肝髒細胞的線粒體(ti) 中zui多。穀丙氨酸氨基轉移酶主要存在於(yu) 肝細胞漿內(nei) ,細胞內(nei) 濃度高於(yu) 血清中1000-3000倍。隻要有1%的肝細胞被破壞,就可以使血清酶增高一倍。因此,穀丙轉氨酶被世界衛生組織推薦為(wei) 肝功能損害zui敏感的檢測指標。
丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒檢測技術簡介
雙抗體(ti) 夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1~10μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nei) 溶液,用洗滌緩衝(chong) 液洗3次,每次3分鍾。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然後洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體(ti) :於(yu) 各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) (經滴定後的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鍾。
5. 終止反應:於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可於(yu) 白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nei) 顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為(wei) 無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀(yi) 上,於(yu) 450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零後測各孔OD值,若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為(wei) 陽性。
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