膠原酶I型，膠原酶I型現貨供應，膠原酶I型產品介紹

膠原酶I型，膠原酶I型現貨供應，膠原酶I型產(chan) 品介紹

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nei) 切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現在膠原中，很少發現於(yu) 其他蛋白中）並切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是*一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結締組織內(nei) 。

本品來源於(yu) 溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅(jin) 含有膠原酶（更準確的稱法為(wei) 梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解

膠原酶I型，膠原酶I型現貨供應，膠原酶I型產(chan) 品介紹

結締組織和上皮組織細胞外基質內(nei) 的其他蛋白，多糖和脂質，使得本品非常適用於(yu) 組織消化。

目前商業(ye) 化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異，分為(wei) 四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向：1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的製備；2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用於(yu) 心髒、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的製備；3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用於(yu) 乳腺細胞的製備；4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用於(yu) 胰島細胞的製備，或者需要維持受體(ti) 完整性的細胞製備實驗。

本品為(wei) I型膠原酶，≥250 U/mg solid，可用於(yu) 上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺等組織和細胞的解離。

酶活力單位定義(yi)

在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nei) 水解膠原產(chan) 生相當於(yu) 1µM L-亮氨酸的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活力單位。

運輸和保存方法

室溫運輸。4℃避光保存，2年有效。儲(chu) 存液-20℃避光凍存。

注意事項

為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

使用方法

1. 膠原酶儲(chu) 存液的配製

向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平衡鹽溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，製備成1g/ml（即1000×）的儲(chu) 存液。然後用低蛋白結合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然後於(yu) -20℃避光凍存。

使用前於(yu) 冰上解凍，避免反複凍融。其用於(yu) 組織和細胞分散的常用濃度為(wei) ：0.5-2.5mg/ml，用於(yu) 軟骨消化的常用濃度為(wei) 1-2mg/ml，需要根據特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的*工作濃度。

2．組織的分離

1）使用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；

2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌組織塊數次；

3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸沒組織塊，並加入膠原酶至需要工作濃度；

4）於(yu) 37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl₂補充消化可以提高消化效率。

5） 已分散開的細胞可使用不鏽鋼或尼龍網篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液於(yu) 37℃繼續孵育；

6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次；

7）細胞培養(yang) 液重懸上述細胞，利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

8）於(yu) 細胞培養(yang) 皿上利用合適細胞培養(yang) 基接種細胞。

3． 器官灌注

1）向37℃預熱的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶，另添加3mM的CaCl₂有助於(yu) 提高分離效率；

2）按照已優(you) 化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液；

3）將上述過程中回收的灌注液流經不鏽鋼或尼龍網篩，從(cong) 而將已解離的細胞或小片段組織塊與(yu) 較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液於(yu) 37℃進一步孵育；

4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次；

5）細胞培養(yang) 液重懸上述細胞，利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

6）於(yu) 細胞培養(yang) 皿上利用合適細胞培養(yang) 基接種細胞。

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