信帆生物：內毒素的去除

內(nei) 毒素對生物應用的影響

    內(nei) 毒素強烈影響DNA轉染到原代細胞和敏感的培養(yang) 細胞中，並且增加的內(nei) 毒素水平導致轉染效率急劇降低。此外，使用不含內(nei) 毒素的質粒DNA用於(yu) 基因治療是極其重要的，因為(wei) 內(nei) 毒素可引起動物和人發燒、內(nei) 毒素性休克綜合征和補體(ti) 級聯的活化。內(nei) 毒素還通過激活非特異性免疫應答，幹擾體(ti) 外轉染到巨噬細胞、B細胞等免疫細胞中。這些反應包括免疫介質如IL-1和前列腺素的誘導合成。確保塑料製品、培養(yang) 基、血清和質粒DNA沒有LPS汙染，避免誤導實驗結果。

內(nei) 毒素測定方法

    經典的內(nei) 毒素測定基於(yu) 內(nei) 毒素與(yu) 鱟變形細胞中的可凝結蛋白之間的凝血反應。現在可使用更靈敏的光度測定（例如，來自BioWhittaker,Inc的Kinetic-QCL Test），其基於(yu) 鱟變形細胞溶胞產(chan) 物（LAL）和合成的產(chan) 生顏色的底物。LPS汙染通常以內(nei) 毒素單位（EU）表示。通，1ng LPS對應於(yu) 1-10EU。

內(nei) 毒素去除

   如今，內(nei) 毒素的去除都會(hui) 使用商業(ye) 化的試劑盒。一般利用多粘菌素B（polymixin B ）連接到瓊脂糖微球上，進行特異性去除內(nei) 毒素。多粘菌素B可通過靜電作用、離子作用、親(qin) 水作用和分子之間的相互作用等多種因素吸附內(nei) 毒素，從(cong) 而達到內(nei) 毒素去除的目的。

   在內(nei) 毒素去除過程中，我們(men) 要切記使用不含內(nei) 毒素的塑料製品和玻璃器皿。為(wei) 了避免在初始內(nei) 毒素去除後對質粒DNA的再汙染，建議僅(jin) 使用經認證無熱原或無內(nei) 毒素的新塑料製品。無內(nei) 毒素或無熱原的塑料製品可以從(cong) 許多不同的供應商處獲得。內(nei) 毒素強烈粘附於(yu) 玻璃器皿，並且在洗滌期間難以*除去。標準實驗室高壓滅菌方法對內(nei) 毒素水平幾乎沒有或沒有影響。此外，如果高壓鍋先前已用於(yu) 細菌，則玻璃器皿將被內(nei) 毒素分子廣泛汙染。180°C加熱玻璃器皿可破壞任何附加的內(nei) 毒素分子。重要的是不要通過使用含內(nei) 毒素的試劑純化無內(nei) 毒素DNA，所有緩衝(chong) 液都需要無內(nei) 毒素。

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