上海信帆：如何配製合適的buffer？

      生物係統對pH的變化非常敏感，PH的變化可能改變或甚至終止正在進行的實驗。 因此，配製有效的保持實驗pH穩定的緩衝(chong) 液對實驗的成功至關(guan) 重要。

建立一個(ge) 良好的緩衝(chong) 體(ti) 係，主要要考慮以下標準：

1. pKa

大多數生物反應發生在PH 6-8之間，因此理想的緩衝(chong) 液需要具有在該範圍內(nei) 的pKa值，以提供zui大緩衝(chong) 能力。 大多數緩衝(chong) 液在20℃，1個(ge) pKa單位內(nei) 的pH下能地工作。 如果你認為(wei) 你的實驗會(hui) 降低反應的pH值，那麽(me) 選擇一個(ge) pKa值略低於(yu) 工作pH值的緩衝(chong) 液。 同樣，如果您希望實驗提高您的工作pH，請選擇pKa略高的緩衝(chong) 液。

2. 溶解性

緩衝(chong) 液應非常易溶於(yu) 水，在非極性溶劑（脂肪，油和有機溶劑）中極少溶解。 這防止緩衝(chong) 液積累在細胞膜，囊泡和其他非極性區室中。

3. 膜不滲透性

緩衝(chong) 液不應該容易地通過細胞膜 ，這可以減少緩衝(chong) 液在亞(ya) 細胞結構中不成比例的累積。

4. zui小鹽效應

鹽雖可以調節化合物的緩衝(chong) 能力，但高離子緩衝(chong) 液可引起生物係統的問題或其它反應。 如：在鈣依賴的反應中應該避免檸檬酸鹽和磷酸鹽緩衝(chong) 液（Tris也能螯合鈣）。

5. 對解離的影響

緩衝(chong) 液濃度、溫度和離子強度應當對緩衝(chong) 液的解離具有zui小的影響。

6. 離子強度

確保你的緩衝(chong) 液對你的實驗環境的離子濃度沒有太大的影響，正常生理離子強度為(wei) ：100-200mM的KCl或NaCl。 一些緩衝(chong) 液，如磷酸鹽，可以顯著影響溶液中離子的濃度。

7. 陽離子相互作用

如果緩衝(chong) 液和陽離子配體(ti) 形成複合物，該複合物應是可溶的。 理想情況是，至少一些緩衝(chong) 化合物不會(hui) 形成複合物。

8. 穩定性

緩衝(chong) 液應當是化學穩定的，抵抗酶促和非酶促降解

9. 生化惰性

緩衝(chong) 液不應影響或參與(yu) 任何生化反應。

10. 光吸收

緩衝(chong) 劑不應吸收波長在230nm和700nm之間的可見光或紫外光。 這防止了對分光光度測定的幹擾。

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