RT-PCR實驗檢測的服務內容

RT-PCR實驗檢測的服務內(nei) 容

服務內(nei) 容：

1.製定個(ge) 性化實驗方案：根據不同的實驗目的確定實驗方案、選定合適的內(nei) 參；
2.檢測類別：mRNA、miRNA、lncRNA、DNA；
3.樣本抽提及質檢：對客戶提供樣本進行RNA抽提，並利用NanoDrop進行樣本質檢；
4.定量PCR預實驗：包括樣本反轉錄為(wei) CDNA、配置PCR反應體(ti) 係及進行Real-TimePCR反應；
5.正式定量PCR實驗：根據預實驗結果進行正式實驗；
6.數據分析：采用2- △△CT法進行分析，比較不同樣本間差異。

服務要求：
1.請提供組織樣本，細胞樣本，血漿或血清樣本，totalRNA；
2.請提供已知的全長基因序列或GeneBank號；
3.請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA來源、基因豐(feng) 度等。

結果內(nei) 容：整理好的報告，樣本收到之日起5個(ge) 工作日內(nei) 反饋質檢結果。

結果展示：

溶解曲線：

擴增曲線

數據統計

每個(ge) 指標有2張圖。一張是擴增曲線，另一張是熔解曲線，用來證明PCR擴增中無非特異性擴增

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a. 動物組織：常規組織，脂肪組織，結締組織，纖維化組織適當增加。將組織剪切成合適大小後（建議組織塊長寬高均不大於(yu) 0.5 cm），然後迅速浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolidTM試劑中。（注意：已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經平衡一段時間後，可從(cong) 溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolidTM試劑中；有些比較弱的液體(ti) 滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolidTM試劑進行RNA保護。）

b.植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大小（建議長寬高均不大於(yu) 0.5 cm）後，然後迅速浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolidTM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表麵的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透，對於(yu) 此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c.細胞等樣本：收集不小於(yu) 10^6個(ge) 細胞的沉澱（用PBS清洗1-2次）。之後迅速加入5～10倍體(ti) 積的RNAsolidTM試劑。

d.酵母、細菌等樣本：離心棄上清，收集小米粒大小的單菌體(ti) 沉澱，然後迅速加入適量的RNAsolidTM試劑浸沒菌體(ti) 沉澱。

e. RNA樣品： OD260/280為(wei) 1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體(ti) 積≥20μL，幹冰運輸。

f.cDNA：cDNA原液≥20 μL，幹冰運輸。

 2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以後部分組織中的RNA會(hui) 開始降解。室溫（25℃）穩定保存1周，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。大部分樣品置於(yu) RNAsolidTM試劑中，4℃條件下可穩定保存1個(ge) 月，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜，然後將RNAsolidTM試劑吸出棄去，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩定保存3～5年。

RT-PCR實驗檢測的服務內(nei) 容