CM-瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用方法

CM-瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用方法

CM-瓊脂糖凝膠FF是一種將羧甲基鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的帶有弱酸陽離子基團的層析分離介質。該產(chan) 品保留了瓊脂糖的親(qin) 水性及大網架結構，與(yu) 生物活性大分子有很好的相容性，具有離子交換容量高，非特異性吸附少，流速快等特點，廣泛用於(yu) 蛋白質、核酸、多肽及多糖等的生物大分子實驗室規模製備和生物製藥、生物工程的工業(ye) 化製備。

使用方法：

　　1. 裝柱

　　1.1 根據分離目標性質配製初始緩衝(chong) 液（平衡液）和洗脫緩衝(chong) 液。

　　1.2 將凝膠抽幹，並用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用初始緩衝(chong) 液（按凝膠:緩衝(chong) 液=3:1的比例）配成勻漿並脫氣。

　　1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩衝(chong) 液潤濕並保持一段液位。

　　1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nei) 壁一次性倒入柱內(nei) ，使凝膠在柱內(nei) 自由沉降。

　　1.5 連結好柱子頂端活動柱頭，打開蠕動泵，讓緩衝(chong) 液用使用時操作流速流過5柱體(ti) 積，再使用1.5倍的操作流速流過5柱體(ti) 積，調節適配柱頭，使其盡量貼近膠麵，最後用2 ~ 3倍柱體(ti) 積的緩衝(chong) 液平衡柱子。

注意：

1)所有操作過程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。

2)如無條件做1.2，填料層有氣泡，可進行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。

3)乙醇等試劑配製的溶液需要脫氣。

　　2. 平衡

　　將平衡緩衝(chong) 液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變。

　　3. 上樣

　　切換轉換閥進行上樣，上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇，也可進行線性實驗找到最佳上樣量；樣品的預處理：除鹽，置換緩衝(chong) 液，澄清過濾（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 衝(chong) 洗

　　用2 ~ 3個(ge) 柱體(ti) 積的平衡緩衝(chong) 液衝(chong) 洗上樣後的層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變，此時未交換的組分被清洗出去。

　　5. 洗脫

　　離子交換柱的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫，一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進行。

　　6. 再生

　　用高鹽濃度的緩衝(chong) 液（含1 ~ 2mol/L NaCl）按操作流速衝(chong) 洗3 ~ 5個(ge) 柱體(ti) 積，接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個(ge) 柱體(ti) 積。

　　若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

　　7. 在位清洗(CIP)

　　對於(yu) 強結合蛋白質或脂類物質，可采用以下流程進行在位清洗：1 mol/L NaOH洗2個(ge) 柱體(ti) 積，8 mol/L尿素洗2個(ge) 柱體(ti) 積， 30%異丙醇洗2個(ge) 柱體(ti) 積，平衡緩衝(chong) 液洗2個(ge) 柱體(ti) 積。

　　在位清洗可有效去除介質上的雜質，反向效果更佳。如需要去除內(nei) 毒素熱原，可以在50 cm/h速度下，1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2h。

CM-瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用方法