生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什麽？

生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什麽(me) ？

相關(guan) 介紹： 

　　生物素瓊脂糖凝膠FF是一種將D-生物素鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親(qin) 和層析分離介質。該介質中的生物素配基能高度特異性親(qin) 和親(qin) 和素、鏈黴親(qin) 和素，親(qin) 和力非常高，可用於(yu) 親(qin) 和素、鏈黴親(qin) 和素及其偶聯物的固定化，固定化後的產(chan) 品可應用於(yu) 診斷檢測，蛋白純化等。也可直接用於(yu) 削弱親(qin) 和力的親(qin) 和素、鏈黴親(qin) 和素的純化。

技術指標：

使用方法：

1、色譜柱裝填

（1）所有需要用到的材料的溫度要與(yu) 色譜操作的溫度一樣，液體(ti) 最好做脫氣處理。

（2）在柱子下端加入蒸餾水，以除去柱子中的空氣，關(guan) 閉柱子出口，在柱內(nei) 保留少量的蒸餾水。

（3）將瓊脂糖凝膠連續倒入柱子時，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nei) 壁引流，以減少氣泡的產(chan) 生，讓填料先自然沉降。

（4）柱壓不超過0.3MPa，如果裝柱係統中無法測柱壓，則正常流速下填裝。

（5）填裝好的生物素瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(ge) 柱體(ti) 積的結合緩衝(chong) 溶液平衡，建議流速100cm/h，平衡後的柱子可以用於(yu) 親(qin) 和素、鏈黴親(qin) 和素的固定化或純化。

2、上樣

（1）緩衝(chong) 液選擇：一般選用pH6-8的結合緩衝(chong) 液，常用緩衝(chong) 液有10-00mM 磷酸鈉緩衝(chong) 液、20-200mM Tris-HCl緩衝(chong) 液等。在緩衝(chong) 液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除離子交換作用。在初次使用生物素瓊脂糖凝膠FF時，推薦使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH調節pH 7.4）作為(wei) 結合緩衝(chong) 液。

（2）樣品處理：樣品的緩衝(chong) 液應與(yu) 所選結合緩衝(chong) 液一致。為(wei) 保證緩衝(chong) 液一致，可以在結合緩衝(chong) 液中破碎細菌、或調解pH與(yu) 結合緩衝(chong) 液一致、或交換至結合緩衝(chong) 液（常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等）、或用結合緩衝(chong) 液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應0.45μm過濾。

3、洗脫

（1）生物素瓊脂糖凝膠FF如結合了親(qin) 和素、或鏈黴親(qin) 和素之後，由於(yu) 親(qin) 和力非常高，通常很難洗脫，可作為(wei) 固定相用於(yu) 其他物質的檢測或純化，比如固定了鏈黴親(qin) 和素-抗原的融合蛋白可用於(yu) 純化對應的抗體(ti) 。

（2）如結合了削弱親(qin) 和力的親(qin) 和素、或鏈黴親(qin) 和素，可在結合緩衝(chong) 液中加入1-5mM的D-生物素作為(wei) 洗脫緩衝(chong) 液，通過競爭(zheng) 的方法洗脫，比如本公司的r-SA2、r-SA3、r-cSA3等產(chan) 品均通過該法純化獲得。

4、除了柱層析以外，也可能通過孵育的方式固定親(qin) 和素、鏈黴親(qin) 和素。

5、在位清洗

（1）用於(yu) 純化時，多次使用後需要再生，本產(chan) 品耐受一定的堿性，推薦使用2-5個(ge) 柱體(ti) 積的0.1M NaOH溶液反向清洗柱子，進行再生。

（2）其他方法，比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%異丙醇等，也可用於(yu) 該介質的再生。

生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什麽(me) ？