植物過氧化氫DAB染色液的使用方法

植物過氧化氫DAB染色液的使用方法

使用方法

1. 試劑準備：將100 mg DAB以磷酸緩衝(chong) 液100 mL充分溶解，得到DAB染色工作液，避光4℃保存，一周內(nei) 有效。注：DAB對光敏感，溶解過程需要避光，如果較難溶解，可通過超聲、磁力攪拌等方法促進溶解。

2. 采集經脅迫（例如重金屬）的植物幼苗或根尖，純水稍洗淨，置於(yu) 濾紙上吸幹多餘(yu) 的水分。將植物幼苗或根尖浸沒在DAB染色工作染液中，常溫避光染色2-6 h，至陽性部位出現深棕色，其餘(yu) 部位近無色或者呈植物本身的顏色即可。（根據植物幼嫩程度、顯色程度調整染色時間）

3. 用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出，浸入純水中來回漂洗3-5次，置於(yu) 濾紙上吸幹多餘(yu) 水分後，浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素，脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。

4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片，浸入純水中來回漂洗3-5次，置於(yu) 濾紙上吸幹多餘(yu) 水分後，將樣本轉入適量DAB樣本保存液中浸泡30 min，隨後可取出拍照。樣本可置於(yu) 該保存液中常溫保存一周。

注意事項

1. DAB染色工作液配製好以後需4℃避光保存，一周內(nei) 使用。存放時間過久，會(hui) 影響顯色。

2. 因過氧化氫容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物應激產(chan) 生過氧化氫，因此植物樣本需要新鮮采集，並盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對照組。

3. 樣本染色完成後盡快拍照保存結果。

4. 操作時請穿實驗服，並佩戴一次性手套。

植物過氧化氫DAB染色液的使用方法