鐵離子檢測試劑盒這麽操作更

鐵離子檢測試劑盒這麽(me) 操作更準確

描述：

鐵是人體(ti) 必需的元素之一，對人體(ti) 的新陳代謝和身體(ti) 健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會(hui) 造成缺鐵性貧血。鐵存在於(yu) 人體(ti) 所有的細胞內(nei) ，各組織、器官包括各內(nei) 分泌腺都含有鐵。肝髒、脾髒和肺組織內(nei) 含量較為(wei) 豐(feng) 富。成人體(ti) 內(nei) 含鐵3～5克，大部分都以蛋白質複合物形式存在，極少部分以離子的形態存在。本試劑盒采用亞(ya) 鐵嗪比色法可以定量細胞鐵離子，線性範圍5~300uM。產(chan) 品包括標準品和空白對照，本試劑盒可進行100個(ge) 樣品的檢測。

原理：

鐵與(yu) 蛋白結合成複合物，在酸性介質中鐵從(cong) 複合物中解離出來，再被還原劑還原成二價(jia) 鐵，並與(yu) 亞(ya) 鐵嗪生成紫紅色化合物，在540-580nm處可比色測定。 其反應如下圖所示：

組成：

1. 細胞裂解液： 20 ml

2. 緩衝(chong) 液： 5ml

3. 檢測劑： 3ml

4. 標準品： 1ml

5. 稀釋用液： 20ml

儲(chu) 存：4℃保存，6個(ge) 月有效。

適用範圍：該試劑盒可用於(yu) 培養(yang) 細胞中鐵離子定量檢測。

用戶自備：4.5%高錳酸鉀溶液5ml（0.225g高錳酸鉀溶解於(yu) 5ml純水中）

操作步驟：

1. 樣品準備：

實驗建議使用六孔板培養(yang) 細胞。將DMEM培養(yang) 過的細胞用冷的PBS 2ml洗兩(liang) 遍，將PBS吸棄（若不馬上檢測可將其凍存於(yu) -20℃）。200ul/孔（或根據實際情況適量增減）裂解液裂解細胞，置於(yu) 搖床裂解2h。

2. 標準品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標準品母液稀釋為(wei) ：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋並設置0濃度對照反應管。

3. 將緩衝(chong) 液與(yu) 4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻，稱為(wei) 混液A。

4. 參考下表使用1.5ml離心管，設置空白對照管、標準品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當稀釋後再進行測定。

5. 混勻，60℃ 孵育1h。

6. 冷卻至室溫，將管蓋與(yu) 管壁上的液滴離心入管底。

7. 加入30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。此步可能產(chan) 生絡合物沉澱，用移液器輕輕吹打即可溶解，若沉澱不溶，12000rpm離心5分鍾，取上層清液即可。

8. 取200ul 於(yu) 96孔板，在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm範圍內(nei) 檢測。

9. 繪製標準曲線並計算鐵離子濃度。

說明：

1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的幹擾。
2. 操作過程中，樣品與(yu) 試劑等避免與(yu) 鐵器接觸，以防汙染。

3. 所測樣本的值高於(yu) 標準曲線的上限，應稀釋樣品後重新測定。

4. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作，檢測試劑有腐蝕性，請小心操作，若不慎沾到皮膚上請馬上用清水衝(chong) 洗幹淨。

5. 該試劑盒僅(jin) 供科學研究使用。