DEAE-瓊脂糖凝膠FF操作說明

上海信帆生物供應DEAE-瓊脂糖凝膠FF，產(chan) 品質量穩定，庫存充足！

DEAE-瓊脂糖凝膠FF

DEAE-瓊脂糖凝膠FF是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質，具有優(you) 異的流動性能，廣泛用於(yu) 生物製藥和生物工程下遊蛋白質、核酸及多肽的離子交換製備。

1. 理化指標

*檢測條件： 層析柱16mm×100mm  *柱床高5cm，25℃，流動相為(wei) 0.1mol/LNaCl。

2. 貯存

產(chan) 品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為(wei) 20% 乙醇），通風、幹燥、清潔的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

3. 應用

本產(chan) 品具有高化學穩定性、高流速、高載量、好的機械性能、可在位清洗、多次重複使用等特點，非特異性吸附低，回收率高，適用於(yu) 工業(ye) 規模生物試劑，適用於(yu) 在pH工作範圍內(nei) 可形成負離子的生物大分子的分離純化，廣泛用於(yu) 生物製藥和生物工程下遊蛋白質、核酸及多肽的離子交換製備。

4. 使用方法

4.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實驗的溫度。配製緩衝(chong) 液，對所有的緩衝(chong) 液進行脫氣處理。

（2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否幹淨和完整。

（3）根據需要量取相應量的凝膠，用去離子水清洗掉20%乙醇。

（4）將柱子底端用水或緩衝(chong) 液潤濕並保持一小段液位，務必使底端無氣泡。

（5）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nei) 壁一次性倒入柱內(nei) ，注意勿使產(chan) 生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nei) 自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

（6）打開蠕動泵，讓緩衝(chong) 液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料大耐壓）。

4.2 平衡

讓平衡緩衝(chong) 液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡液是低濃度的緩衝(chong) 溶液，如Tris 、PBS等。

4.3 上樣

（1）樣品用平衡液配製，渾濁的樣品要離心和過濾後上樣。鹽濃度太大的樣品處理後再上樣。

（2）一般情況是讓目標產(chan) 品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chan) 品。

（3）介質對樣品組分吸附的程度取決(jue) 於(yu) 樣品的帶電性質、流動相的離子強度和pH值。推薦的操作pH應在緩衝(chong) 液pKa的0.5個(ge) 單位內(nei) ，並且和目標分子的等電點（pI）相差至少一個(ge) pH單位。

Buffers for anion exchange chromatography

4.4 洗脫

DEAE介質可用增大鹽濃度或減小pH值進行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。

4.5 再生

一般用高鹽濃度的緩衝(chong) 液（含1~2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體(ti) 積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

4.6 在位清洗

（1）對於(yu) 以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對沉澱蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂類，可用0.1 M NaOH 去除。清洗完畢後，用至少10倍純水清洗柱子至中性。

4.7 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流幹，氣泡進入。

5. 保存

使用完的填料，用純水*衝(chong) 洗，後保存在4℃（保存溶液為(wei) 20%乙醇），不能冷凍。

6 注意事項

（1）上樣前，樣品必須過濾及去除色素，否則雜質及色素會(hui) 被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩衝(chong) 液均需要用0.45um的過濾器過濾。

（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低於(yu) 0.15摩爾，堿會(hui) 使流速變慢。

（3）離子交換介質在選擇層析柱時，避免使用細長柱，會(hui) 增加實驗操作壓力。

（4）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關(guan) 的文獻進行。

DEAE-瓊脂糖凝膠FF操作說明