凍幹補體，血清總補體如何正確使用

凍幹補體(ti) ，血清總補體(ti) 如何正確使用

上海信帆生物供應凍幹補體(ti) ，規格為(wei) 0.5ml一隻，一盒10隻，使用的時候用蒸餾水複溶，產(chan) 品現貨供應，歡迎大家谘詢！

使用方法：每支加0.5ml蒸餾水複溶，靜置10分鍾後輕輕搖勻；滴定時用緩衝(chong) 生理鹽水或緩衝(chong) 液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀釋使用，臨(lin) 用現配。

穩定性：4-8℃保存3年(暗處保存)

用途：總補體(ti) 溶血活性(CH50)檢測使用

產(chan) 品規格：0.5ml/支*10

注意事項：請穿戴實驗服及一次性手套操作。

血清總補體(ti) 溶血活性(CH50)測定方法一、原理利用綿羊細胞與(yu) 相應抗體(ti) (溶血素)結合成的複合物，可激活血清中的補體(ti) ，導致紅細胞溶解，當紅細胞和溶血素量一定時，在規定反應的時間內(nei) ，溶血程度與(yu) 補體(ti) 量及活性呈正相關(guan) 。在接近50%溶血(CH50)時，二者之間近似直線關(guan) 係，故以50%溶血作為(wei) 敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的小補體(ti) 量為(wei) 一個(ge) CH50U，可計算出待測血清中總的補體(ti) 溶血活性，以CH50U/ml表示。

本實驗主要反映補體(ti) 經典活化途徑的溶血功能，其結果與(yu) 補體(ti) C1～C9各組成分的量及活性均有關(guan) 。

二、試劑及配製

1.緩衝(chong) 生理鹽水：(1)貯存液：Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸餾水定容至100ml4℃保存備用(2)應用液：5ml貯存液加95ml蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1ml，當日配製，12小時內(nei) 使用。

2.2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，於(yu) 等量Alsever液中可保存3周。用前以緩衝(chong) 液洗3次，並配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。

3.溶血素：將綿羊紅細胞溶血素(效價(jia) 1:4000)，用應用液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999ml應用液)。

4.待測血清：新鮮血液室溫放置30min，再4℃放置60min，使血收縮，4℃離心(3000r/min)10min，取上清，-20℃保存。

三、操作步驟試管法(改良Mayer法)

1.致敏羊紅細胞：2%綿羊紅細胞加等量稀釋後的溶血素(1:2000)，混勻，置37℃水浴30min。

2.稀釋血清：待測血清0.2ml，加應用液3.8ml，稀釋度為(wei) 1:20。

3.配製溶血標準管：全溶血管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水，混勻。50%溶血管:取全溶血管液2ml加緩衝(chong) 液2ml。

4.按表所示，依次加各成分於(yu) 試管中，混勻，置37℃水浴30min，第10管為(wei) 非溶血對照：補體(ti) CH50測定試管法

5.結果測定：取出試管，2000r/min離心10min，對照管應不溶血。肉眼比色，選與(yu) 50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測(波長542nm、0.5cm比色杯)OD值，確定與(yu) 標準管接近者為(wei) 終點管，然後按下公式計算CH50值：血清補體(ti) CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀釋度。如第5管為(wei) 終點管，測待測血清中CH50為(wei) 66.7U/ml。血清補體(ti) CH50正常值為(wei) 50-100U/ml。

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