明膠酶譜法試劑盒細胞樣本該如何處理

 

　　明膠酶譜法試劑盒操作簡單，靈敏度高。上海信帆生物供應的MMP試劑盒采用酶譜法（zymography）檢測MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一種廣為使用的、基於SDS-PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM，高於ELISA方法,而且可檢測幾百個樣本。

 

　　基質金屬蛋白酶MMP2/MMP9明膠酶譜試劑盒，其中脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V），很多老師不明年這裏麵的冰醋酸是什麽，我們今天給大家講解一下。這個冰醋酸不是醋酸也不是乙酸，冰醋酸也叫冰乙酸，就是純的無水乙酸。不過我們選擇常規的98%乙酸也是可以的。

 

　　明膠酶譜法試劑盒細胞樣本應該如何處理：細胞樣本用PBS，5倍體積震蕩裂解,估算細胞的體積，然後加入5倍體積的PBS，渦旋振蕩15-30s,而後靜置或低速離心。或者手動震蕩。明膠酶譜法試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一種廣為使用的、基於SDS-PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM，高於ELISA方法，其基本原理和程序是：製備加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳，電泳結束後取出凝膠與酶反應Buffer孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由於含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9特異蛋白底物及酶學反應緩衝液，可檢測少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測，如果小膠加樣孔為10~15個，則總計可檢測500~750個樣品。