WB實驗代測中的顯影原理

　　WB實驗代測中的顯影原理

　　WB，也稱Western blot、Western blotting、Western印跡，是用抗體(ti) 檢測蛋白的重要方法之一。Western可以參考如下步驟進行操作。

　　與(yu) southern或northern雜交方法類似，但western免疫印跡采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體(ti) ，“顯色”用標記的二抗。經過page分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(ti) 上，固相載體(ti) 以非共價(jia) 鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體(ti) 上的蛋白質或多肽作為(wei) 抗原，與(yu) 對應的抗體(ti) 起免疫反應，再與(yu) 酶或同位素標記的第二抗體(ti) 起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於(yu) 檢測蛋白水平的表達。

　　進行WB實驗代測時設置的對照

　　成功進行WB實驗代測，則設置合適正確的對照是*的，隻要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，並保證實驗結果的準確性和特異性！一般需要設置的對照如下：陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用於(yu) 檢測抗體(ti) 的工作效率；陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用於(yu) 檢測抗體(ti) 的特異性；二抗對照：不加一抗，用於(yu) 檢測二抗的特異性；內(nei) 參對照：檢測標本的質量和二抗係統；空白對照：不加一抗和二抗；用於(yu) 檢測膜的性質和封閉的效果。