信帆生物為您總結：RNA提取方法匯總

信帆生物為(wei) 您總結：RNA提取方法匯總

這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。

1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法

原理：使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效抑製RNA酶的活性，經過起始密度為(wei) 1.78g/ml的氯化銫介質，進行密度梯度超速離心，RNA沉澱於(yu) 管底，而DNA與(yu) 蛋白質在上清中。使用這種方法，不但能得到高質量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體(ti) DNA.

本法對於(yu) 冷凍時間長、細胞質和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞（如胰腺）的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質量好和成功率高，已成為(wei) 提取哺乳動物細胞RNA的常規方法。其缺點是操作複雜、流程長，一次提取的樣品數量有限。

2、鹽酸胍-有機溶劑法

本法有MacDonald 1987年在Strohman報道的方法基礎上改進而成的，適用於(yu) 沒有超速離心及設備的情況下提取細胞總RNA。它利用鹽酸胍抑製RNA酶，勻漿裂解細胞，有機溶劑抽提去除蛋白質，通過選擇性沉澱RNA分子而去除DNA，提取的RNA質量較好，但整個(ge) 操作過程繁雜費時。

3、氯化鋰-尿素法

本法首先由Auffray報道，利用高濃度尿素變性蛋白質同時抑製RNA酶，3mol/L LiCl選擇性沉澱RNA。其缺點是有時會(hui) 存在DNA汙染，LiCl沉澱RNA會(hui) 丟(diu) 失一些小分子量的RNA，如5S RNA等。優(you) 點是快速簡捷，尤其適用於(yu) 大量樣品少量組織細胞的RNA提取，其質量可以滿足Northern分析，Oligo（dT）提取mRNA，SI核酸酶或RNase保護實驗等。本法每提取107個(ge) 細胞能提取總RNA約10?g。

4、熱酚法

本法主要用於(yu) 少量細胞樣品RNA提取，其產(chan) 量不高，但簡單易行。

5、快速提取法

本法主要用於(yu) 培養(yang) 細胞，通過0.5%SDS裂解細胞，酚抽提去除蛋白質和DNA沉澱，快速純化RNA。

6、細胞質RNA提取法

本法主要適用於(yu) 培養(yang) 細胞，首先去除細胞核，然後用蛋白酶K消化蛋白質，酚/氯方抽提去除蛋白質。操作簡單，同時能進行多個(ge) 樣品操作，多數步驟在室溫下進行，提取的RNA質量較高，可滿足體(ti) 外無細胞翻譯係統、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保護實驗。本法提取的RNA產(chan) 量一般為(wei) 30～500?g/107個(ge) 細胞。

7、酚-氯化鋰法同時提取細胞RNA和DNA

本法是在Elion和Warner報道的方法基礎上，有Sandeep等人於(yu) 1990年改進而成。它通過酚和SDS裂解細胞，變性，解聚蛋白，抑製RNase，並用EDTA保護DNA，後根據RNA和DNA在Li+中的不同沉澱速度，而分離DNA和RNA。整個(ge) 過程在2小時內(nei) 完成。RNA可用於(yu) Northern分析，DNA可用於(yu) 內(nei) 切酶消化以及Southern雜交實驗。

8、一步快速熱酚抽提法

基於(yu) Shomczynki和Sacchi兩(liang) 人於(yu) 1987年報道的RNA快速提取法，美國Promega公司有機地將這些試劑組合成總RNA試劑盒，使操作更為(wei) 簡單方便，並突出體(ti) 現以下幾個(ge) 優(you) 點：1）將已知強的RNase抑製劑異硫氰酸胍、b-巰基乙醇和去汙劑N-十二烷基肌氨酸鈉聯合使用，抑製了RNA的降解，增強了對核蛋白複合物的解離，使RNA與(yu) 蛋白質分離進入溶液，提高了RNA的提取產(chan) 量；2）RNA選擇性地進入無DNA和蛋白質的水相，容易被異丙醇沉澱濃縮，對大量或少量組織的細胞RNA提取，均甚合適；3）可在3小時以內(nei) 處理大量樣品，省略了氯化銫密度梯度超速離心步驟及其它方法使用的長時間選擇性乙醇沉澱或LiCl沉澱。LiCl沉澱不但會(hui) 導致小RNA（<5.8S）的丟(diu) 失，而且Li+鹽的殘留還會(hui) 抑製DNA的合成反應。

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