信帆生物帶您了解：革蘭氏染色方法和染色原理

信帆生物帶您了解：革蘭(lan) 氏染色方法和染色原理

革蘭(lan) 氏染色主要用來區分革蘭(lan) 氏陽性菌和革蘭(lan) 氏陰性菌。先來介紹一下這個(ge) 實驗原理：

因為(wei) 革蘭(lan) 氏陽性菌的細胞壁較厚，肽聚糖網層較厚且交聯致密，沒有類脂存在，而革蘭(lan) 氏陰性菌的細胞壁薄，肽聚糖網層薄且交聯較差，外膜上存在較多的類脂。兩(liang) 者的這些區別造成了在進行革蘭(lan) 氏染色後出現不同染色結果。

革蘭(lan) 氏陽性菌：當結晶紫染液和碘液相遇後，形成不溶性的有色複合物，當用乙醇脫色時，因為(wei) 胞體(ti) 的失水，而使得肽聚糖交聯更加緊密，網孔縮小，把紫色複合物截留在細胞內(nei) ，從(cong) 而使細胞呈現紫色；而革蘭(lan) 氏陰性菌與(yu) 乙醇脫色時，以類脂為(wei) 主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能截留形成的紫色複合物，所以呈現無色，再經沙黃複染後呈現紅色。

革蘭(lan) 氏染色方法：

1、塗片：利用移液槍吸取10ul的菌液滴在載玻片，用燒紅的塗菌棒塗抹均勻，麵積適中。

2、幹燥與(yu) 固定：將載玻片放置在酒精燈火焰上方一定距離處，塗菌麵向上，將菌液烤幹，溫度不宜過高，炙烤不宜時間太長，固定就是將塗菌麵向上，載玻片快速在火焰中過2-3次。

3、初染：在菌液麵上滴加1-2滴草酸銨結晶紫，染色1min

4、水洗：在小股水流下衝(chong) 洗，直至無色為(wei) 止。

5、媒染：吸取300ul碘液滴在樣本上，染色1min。

6、水洗：在小股水流下衝(chong) 洗，直至無色為(wei) 止。

7、脫色：傾(qing) 斜玻片，滴加95%的乙醇，約30s，再水洗一次。

8、複染：在樣本上滴加沙黃染液1-2滴，染色1min。

9、水洗：在小股水流下衝(chong) 洗，直至流過玻片的水無色為(wei) 止。

10、幹燥與(yu) 觀察：用紙擦去水，幹燥後在顯微鏡下觀察，菌體(ti) 呈現紫色的是革蘭(lan) 氏陽性菌，呈現紅色的是革蘭(lan) 氏陰性菌。

信帆生物帶您了解：革蘭(lan) 氏染色方法和染色原理